a549細(xì)胞是一種廣泛使用的人肺腺癌細(xì)胞系

　　a549細(xì)胞是一種廣泛使用的人肺腺癌細(xì)胞系，來源于原發(fā)性肺腫瘤。具有高度增殖性，現(xiàn)已被用于各種研究應(yīng)用。在自然界中，這些細(xì)胞是鱗狀的，它們可以通過肺泡擴(kuò)散傳播一些物質(zhì)，如水和電解質(zhì)。如果將A549細(xì)胞體外培養(yǎng)，它們會成長為單層細(xì)胞，附著或緊貼在培養(yǎng)瓶上。人肺泡上皮細(xì)胞株A549可以固定或懸掛在體外的溶液。這些細(xì)胞的另一個特點(diǎn)是他們能夠合成卵磷脂，并且含有高度不飽和的脂肪酸，這對于維持細(xì)胞膜磷脂有重要意義。
 

　　a549細(xì)胞傳代：
 

　　(1)無菌操作打開培養(yǎng)瓶瓶蓋，倒掉培養(yǎng)液。
 

　　(2)向已經(jīng)長滿得細(xì)胞中加入消化液1m1，輕輕搖動培養(yǎng)瓶，使消化液流遍所有得細(xì)胞表面，吸棄或倒掉，輕輕沖洗細(xì)胞表面2~3遍，以盡可能去除原培養(yǎng)液中得牛血清。
 

　　(3)加入1ml消化液，在37℃培養(yǎng)箱中孵育5~8min后把培養(yǎng)瓶放置在倒置顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞得胞質(zhì)回縮、胞間質(zhì)增大后，立即終止消化、
 

　　(4)加入5ml預(yù)熱至37℃得培養(yǎng)液，用玻璃吸管反復(fù)吹打以分散細(xì)胞、吹打過程按順序進(jìn)行，從培養(yǎng)瓶底部一邊開始到另一邊結(jié)束，以確保所有得底部都被吹到、
 

　　(5)吸取一半得細(xì)胞懸液，接種到新得25cm2培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，并且添加10%~20%得胎牛血清。通常每瓶液體量為5～10ml。
 

　　(6)倒置顯微鏡下觀察，37℃、5%C0。培養(yǎng)。
 

　　a549細(xì)胞的維持和培養(yǎng)：
 

　　(1)準(zhǔn)備一個盛有37℃溫水的燒杯，從液氮罐中取出存有A549細(xì)胞的凍存管，放于37℃溫水中，用鑷子夾住輕輕搖動使其迅速融化。
 

　　(2)1000~2000r，3~5min離心。
 

　　(3)在無菌操作臺中采用75%的乙醇*擦拭凍存管，然后打開凍存管，注意動作要輕柔。
 

　　(4)用1ml槍頭將上清液去除，加入1ml預(yù)熱的細(xì)胞培養(yǎng)液將細(xì)胞吹散開，轉(zhuǎn)移至25cm2培養(yǎng)瓶中。
 

　　(5)補(bǔ)充4ml的RPMI1640培養(yǎng)基，并且添加10%的胎牛血清。
 

　　(6)倒置顯微鏡下觀察，37℃、5%C02培養(yǎng)。
 

　　(7)24h后，更換新的培養(yǎng)液。
 

　　(8)常規(guī)傳代培養(yǎng)。