小鼠原代細胞的相關知識普及

　　小鼠原代細胞培養是指直接從動物體內獲取的細胞、組織和器官，經體外培養后，直到傳代為止。這種培養，首先用無菌操作的方法，從動物體內取出所需的組織（或器官），經消化，分解成單個游離細胞，在人工培養下，使其不斷的生長及繁殖。

 

　　細胞培養是一種操作繁瑣而又要求十分嚴謹的實驗技術。是用無菌的方法將動物體內的組織（或器官）取出，模擬動物體內的生理條件，在體內進行培養，使其不斷生長、繁殖，人們借以觀察細胞生長、繁殖、細胞分化以及細胞衰老等過程的生命現象。要使細胞能在體外長期生長，必須滿足兩個基本要求：一是供給細胞存活所必須的條件，如適量的水、無機鹽、氨基酸、維生素、葡萄糖及其有關的生長因子、氧氣、適宜的溫度，注意外環境酸堿度與滲透壓的調節。二是嚴格控制無菌條件。

 

　　細胞培養的意義：具有其他生物技術不可對比的優點培養條件易改變和控制便于單因子分析便于人們直接對細胞內結構、細胞生長及發育等過程的觀察在生物學的各個領域如分子生物學、細胞生物學、遺傳學、免疫學、腫瘤學及病毒學等已被廣泛應用。細胞培養的局限性在脫離機體復雜環境下細胞培養條件與軀體環境有一定距離觀察到的結果有時難以正確反映機體內的狀況細胞培養得到的產物少。

 

　　小鼠原代細胞實驗步驟:

　　1、小鼠麻醉

　　根據體重計算相應的麻醉劑量并腹腔注射（也可以用異氟烷進行空氣麻醉）

　　2、對*麻醉后的小鼠進行解剖，打開腹腔，找到小鼠下腔靜脈及門靜脈，使用滯留針插入下腔靜脈，將50-60ml的緩沖溶液一在10-20min內緩慢注射進入小鼠血液循環內，看到小鼠肝臟有明顯腫脹時剪開門靜脈，完成后改用緩沖溶液二進行沖洗。

　　3、沖洗完成后，將小鼠肝臟剪下，轉移至DMEM高糖培養基，用DMEM培養基清洗2-3次后，使用滅菌鑷子將肝臟在培養基內撕開，使原代肝細胞從肝臟內流出。

　　4、將分離得到的肝臟細胞過篩網篩選，過濾組織碎塊及其他雜質，并對細胞混懸液離心，按照一定的離心力得到初步的肝細胞沉淀，此時的肝細胞中混雜著肝臟實質細胞和非實質細胞，需要使用percoll離心液進行梯度離心。

　　5、梯度離心后的細胞即為原代肝臟實質細胞，重懸后計數即可用于后續的實驗，若對細胞純度存疑，也可以進行流式測定。