小鼠原代細胞的改良培養(yǎng)

　　小鼠原代細胞培養(yǎng)技術(shù)日漸成熟，但在同樣實驗條件下不易獲得，而小鼠基因組與人類基因組有更多相似之處，具有更高的研究價值。改進小鼠乳鼠原代心肌細胞的培養(yǎng)方法，得到純度高、活力強、保持心肌細胞原有結(jié)構(gòu)和功能的心肌細胞。

　　方法：將小鼠心肌組織利用酶消方法分離為單個的心肌細胞，實驗步驟中將經(jīng)典的胰酶、膠原蛋白酶混合酶消法分解開，先用胰酶消化心肌組織，使心肌組織變得松散，再用膠原蛋白酶，作用于細胞間質(zhì)的膠原纖維，使心肌組織分離為單個的小鼠原代細胞。調(diào)整胰酶和IⅡ型膠原蛋白酶的濃度和作用時間，嚴格控制試劑pH值和各步驟的溫度。

　　結(jié)果與結(jié)論：心肌細胞在接種24h后開始貼壁，48h后可觀察到部分心肌細胞出現(xiàn)自主搏動，72h后彼此形成交聯(lián)，96h后可觀察到心肌細胞形成細胞簇，并出現(xiàn)一致性搏動。心肌細胞的存活率和純度均達95%以上。結(jié)果證實，實驗采用改良方法成功培養(yǎng)出小鼠原代細胞，并且保留心肌細胞的結(jié)構(gòu)和功能，純度和成活率高，是可行的培養(yǎng)方法。

　　小鼠原代細胞之所以大力培養(yǎng)原因是小鼠基因組與人類基因組有更多相似之處，具有更高的研究價值。國內(nèi)外學(xué)者對通過培養(yǎng)原代乳鼠心肌細胞，從而進一步研究心肌細胞對缺氧、缺血等相關(guān)心臟疾病的發(fā)病機制進行了大量工作。大鼠心肌細胞原代培養(yǎng)技術(shù)日漸成熟，但是小鼠心肌細胞在同樣實驗條件下不易獲得。采用混合酶消化心肌細胞，而是先用胰酶消化，后用膠原蛋白酶消化的實驗方法獲得心肌細胞，此種操作方法可得到純度高、活力強、保持心肌細胞原有結(jié)構(gòu)和功能的心肌細胞。