細(xì)胞“罷工”？！細(xì)胞傳代后增殖緩慢之謎！

培養(yǎng)箱里，我們的“小勞模"細(xì)胞們每天忙著分裂增殖，為我們的實(shí)驗(yàn)貢獻(xiàn)著力量。然而，有時(shí)候，這些小家伙們卻會(huì)突然“罷工"，傳代后的增殖速度變得慢如蝸牛，仿佛一夜之間愛上了慢生活。這背后究竟是什么原因呢？怎樣才能讓細(xì)胞們恢復(fù)干勁呢？ 請(qǐng)看下文：

接種密度低

你知道嗎？很多細(xì)胞都有密度依賴。細(xì)胞自身會(huì)分泌一些因子到培養(yǎng)基中促進(jìn)周圍的細(xì)胞生長（旁分泌）。細(xì)胞密度太低，這種化學(xué)信號(hào)的傳遞減弱，細(xì)胞狀態(tài)受到影響。接種密度越低，增殖越慢，甚至不增殖。

解決方案：根據(jù)細(xì)胞生長速度確定合適的傳代比例和接種密度。如果細(xì)胞已經(jīng)傳稀了，可以耐心繼續(xù)培養(yǎng)，或?qū)⒓?xì)胞重新傳到更小的器皿中，增加密度。特別提醒！T25培養(yǎng)瓶底面積為25cm2，10cm培養(yǎng)皿底面積是55cm2，所以一個(gè)T25傳兩個(gè)10cm皿約等于1：4傳代，而不是1：2

培養(yǎng)基、血清不合適

想象一下，你突然來到一個(gè)全新的城市上學(xué)上班，面對(duì)全新的環(huán)境，是不是也需要適應(yīng)一段時(shí)間呢？細(xì)胞突然被換到新的培養(yǎng)基和血清中，也會(huì)出現(xiàn)水土不服的情況，特別是對(duì)血清要求高的細(xì)胞。新的培養(yǎng)基或血清不對(duì)細(xì)胞胃口時(shí)，導(dǎo)致它們“食欲不振"，生長速度自然就慢了下來。

解決方案：

檢查新培養(yǎng)基和原培養(yǎng)基的配方是否有差異，是否需要額外添加試劑，成分盡量保持一致。新培養(yǎng)基和原培養(yǎng)基混合培養(yǎng)1-2代，讓細(xì)胞慢慢適應(yīng)，如果細(xì)胞正常生長，再完quan替換為新的培養(yǎng)基。如果它們實(shí)在適應(yīng)不了新培養(yǎng)基，還是換回原培養(yǎng)基，畢竟實(shí)驗(yàn)不等人啊！另外，記得定期換液，別等培養(yǎng)基都變成金黃色了才換，這無異于把細(xì)胞活活餓死！

細(xì)胞受損

在細(xì)胞傳代的過程中，如果發(fā)生一些“工傷"事故，比如胰酶消化時(shí)間過長，導(dǎo)致它們受傷；消化時(shí)間過短，細(xì)胞們還沒完quan分開，就被強(qiáng)行“搬家"了，導(dǎo)致細(xì)胞膜受損；重懸時(shí)瘋kuang吹打，生怕吹不均勻，結(jié)果把細(xì)胞打得半死不活，都會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖速度變慢。

解決方案：

傳代時(shí)嚴(yán)格控制胰酶消化時(shí)間，控制吹打次數(shù)和力道。如果細(xì)胞已經(jīng)受損了，傳代后漂浮細(xì)胞和碎片很多，可以嘗試提高血清濃度（總量不超過20%），幫助它們恢復(fù)元?dú)狻?/span>如果傷情嚴(yán)重，搶救失敗，那還是重新復(fù)蘇吧！

細(xì)胞衰老

原代細(xì)胞以及一些有限傳代的細(xì)胞系，隨著傳代次數(shù)增多，細(xì)胞生長速度逐漸減慢，最終停止增殖。

解決方案：

細(xì)胞衰老是自然法則無法避免，但我們可以通過優(yōu)化培養(yǎng)條件和操作，讓細(xì)胞盡可能保持好的狀態(tài)，并及時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于有限細(xì)胞系，要記得凍存早期代次作為備份。對(duì)于原代細(xì)胞，則要規(guī)范提取步驟，保證細(xì)胞質(zhì)量穩(wěn)定，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性才能更好。

雖然細(xì)胞不增殖的時(shí)候我們心急如焚，但也讓我們更加深入了解自己細(xì)胞的特性。通過不斷探索和實(shí)踐，當(dāng)我們找到了z適合的培養(yǎng)方案，細(xì)胞們會(huì)更加健康、快樂地生長著。祝各位同學(xué)和自己的細(xì)胞們相處愉快！