貼壁細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)突然飄了很多怎么辦？

同學(xué)們有沒有遇到這種情況：辛辛苦苦培養(yǎng)了一批貼壁細(xì)胞，正準(zhǔn)備美美地做實(shí)驗(yàn)，有一天突然發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變少了！細(xì)胞并不是消失了，而是在培養(yǎng)液中大量漂浮著，像一群失去了方向的氣球。你不知道該怎么辦，只能無奈地看著細(xì)胞越養(yǎng)越少。別擔(dān)心，小尚會(huì)告訴你原因和解決方法，建議速速放入收藏夾以備不時(shí)之需！

首先，同學(xué)們需要了解，細(xì)胞漂浮是一個(gè)很常見的現(xiàn)象，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)有部分漂浮但細(xì)胞仍然正常生長，這種情況無需特殊處理。特別是呈島狀生長的細(xì)胞，漂浮細(xì)胞看起來會(huì)比較多，保持2-3天換液一次即可，換液的同時(shí)漂浮細(xì)胞順便也被清除了。

但如果細(xì)胞突然大量漂浮，貼壁的部分明顯減少，細(xì)胞不再生長，則需要按照下面的內(nèi)容排查原因并正確處理。

看起來漂浮細(xì)胞較多，但貼壁細(xì)胞正常生長，并沒有受到影響，正常培養(yǎng)即可

細(xì)胞大量異常漂浮，貼壁細(xì)胞狀態(tài)不佳，需排查原因

1. 溫度影響

細(xì)胞不能著涼哦！貼壁比較弱的細(xì)胞如果遇到了冷的環(huán)境，會(huì)皺縮甚至脫落，換液等操作之前必須將培養(yǎng)基、PBS等試劑置于37度充分預(yù)熱。細(xì)胞不能靠近冰冷的物品，不要將剛從冰箱拿出的物品放在細(xì)胞旁邊。冬季尤其需要注意，未開空調(diào)的細(xì)胞房氣溫較低，細(xì)胞拿出培養(yǎng)箱觀察的時(shí)間不能太長，否則長時(shí)間在低溫環(huán)境下細(xì)胞也容易皺縮脫落。盡量控制觀察次數(shù)，不要太頻繁。

2. 傳代操作的影響

若消化操作不當(dāng)，細(xì)胞極易受損，最終死亡漂浮。細(xì)胞在傳代消化的時(shí)候應(yīng)該注意中和的時(shí)機(jī)。一般消化時(shí)每隔30s-1min拿出觀察，直到部分細(xì)胞能自然脫落時(shí)再終止消化。避免消化不C底，強(qiáng)行將細(xì)胞吹下造成損傷，同時(shí)也避免消過度造成損傷。中和吹打時(shí)注意槍頭不要與細(xì)胞層接觸，離心重懸時(shí)吹打次數(shù)不宜過多，力度要輕柔，吹打時(shí)可留少許液體在槍頭內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。

終止消化的時(shí)機(jī)

（重懸吹打教學(xué)視頻）

3. 培養(yǎng)基與血清的影響

若培養(yǎng)基、血清等培養(yǎng)試劑開封時(shí)間較長，培養(yǎng)箱CO2供氣異常等情況，可能導(dǎo)致培養(yǎng)基pH值、滲透壓異常、細(xì)胞因子降解等種種問題，從而導(dǎo)致細(xì)胞漂浮。

建議培養(yǎng)試劑開封后正確分裝儲(chǔ)存，并盡快使用。

血清對(duì)細(xì)胞貼壁起著至關(guān)重要的影響，血清不合適也可能導(dǎo)致細(xì)胞過多漂浮，此時(shí)應(yīng)嘗試不同品牌的血清，選擇出最合適的血清進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。

CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱要定期維護(hù)，保證細(xì)胞生長環(huán)境穩(wěn)定。

4. 細(xì)胞密度影響

細(xì)胞密度過低或過高都可能影響細(xì)胞貼壁，過低時(shí)細(xì)胞生長減慢甚至無法生長最終漂浮；細(xì)胞長滿后未及時(shí)傳代，長時(shí)間高密度培養(yǎng)，細(xì)胞將會(huì)受損漂浮。因此要注意接種密度不要過低，密度至80%及時(shí)傳代。

密度過低

密度過高

5. 培養(yǎng)器皿的影響

一般來說，培養(yǎng)貼壁細(xì)胞需要使用表面處理過的器皿。所謂表面處理，就是通過特定的方法使器皿底部具有親水性，有效提高細(xì)胞的貼壁性，大家購買培養(yǎng)器皿的時(shí)候需要多多留心。如果細(xì)胞貼壁太弱了，一碰就脫落，可以嘗試用多聚賴氨酸、膠原蛋白等物質(zhì)包被培養(yǎng)器皿，以增加細(xì)胞貼壁牢固度。

總之，如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞大量異常漂浮，排查原因并盡快處理通常可以解決。

希望這篇文章對(duì)你有所幫助!