原代細(xì)胞復(fù)蘇操作

　　一、準(zhǔn)備材料
 

　　(1)儀器：凈化工作臺、離心機、恒溫水浴箱、倒置相差顯微鏡、培養(yǎng)箱、液氮冰箱
 

　　(2)玻璃器皿：吸管(彎頭、直頭)、培養(yǎng)瓶、玻璃瓶(250ml、100ml)、廢液缸
 

　　(3)塑料器皿：吸頭、槍頭、膠塞、移液管(10ml)、15ml離心管、凍存管(1～2ml)
 

　　(4)其他物品：微量加樣槍、紅血球計數(shù)板、記號筆、醫(yī)用橡皮膏、移液槍
 

　　(5)試劑：PBS、小牛血清、培養(yǎng)液、雙抗(青霉素、鏈霉素)、胰蛋白酶(0.08%)
 

　　二、操作步驟

 

　　(1)原代細(xì)胞從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并不時搖動令其盡快融化。
 

　　(2)從37℃水浴中取出凍存管，75%酒精**后，打開蓋子，用吸管吸出細(xì)胞懸液，加到離心管中。PriCells推薦接種培養(yǎng)瓶，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。
 

　　(3)離心，1000rpm，5min。PriCells推薦不離心。
 

　　(4)棄去上清液，加入含10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，計數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度，接種培養(yǎng)瓶，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。PriCells推薦小牛血清濃度依據(jù)原代細(xì)胞種類。
 

　　(5)次日更換一次1/2培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。
 

　　三、注意事項
 

　　(1)將凍存管從液氮容器中取出時，要做好防護工作，以免**。
 

　　(2)取出凍存管后立即放入水浴中，使其盡快融化(在1-2分鐘內(nèi))。
 

　　(3)復(fù)蘇*好用新配制的培養(yǎng)液。