293細胞正確的培養步驟

　　293細胞被用于腺病毒載體的繁殖。利用病毒進化目標基因并將其轉移到細胞中是一種有效的方法。然而，由于病毒作為病原體的特性，它們也會帶來風險。因此，為了繁殖這種病毒載體，需要一種能夠表達缺失基因的細胞系。不僅具有生成人糖基化譜和建立調控記錄的能力，而且具有多種優勢，是一種特別有吸引力的重組蛋白表達系統。
 

　　293細胞培養步驟：
 

　　一、復蘇細胞：
 

　　將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL*培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入6cm皿中)，培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
 

　　二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
 

　　a)對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
 

　　1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
 

　　2.加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的*培養基終止消化。
 

　　3.輕輕吹打細胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
 

　　4.按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6ml培養液的新皿中或者瓶中。
 

　　b)對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
 

　　方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。
 

　　方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。