【小尚教細胞】傳代細胞的常規(guī)培養(yǎng)

傳代時間一般通過兩個方面進行確定：一是在細胞培養(yǎng)過程中，當培養(yǎng)液由于 ph值下降而呈現(xiàn)黃色時，表明細胞已經(jīng)達到最大密度，需要換液或進行傳代培養(yǎng)；二是觀察細胞形態(tài)，健康細胞形態(tài)飽滿，折光性好，生長致密時即可傳代。初代培養(yǎng)的初次傳代很重要，是建立細胞系的關鍵時期。在初次傳代時一般要特別注意以下3點：

①細胞沒有生長到足以覆蓋瓶底壁的大部分表面之前，不要急于傳代。

②原代培養(yǎng)時細胞多為混雜生長，上皮樣細胞和成纖維樣細胞并存的情況很常見。傳代時不同的細胞有不同的消化時間，因此要根據(jù)需要，注意觀察及時進行處理，并可根據(jù)不同細胞對胰蛋白酶的耐受時間不同而分離和純化所需要的細胞。另外早期傳代的培養(yǎng)細胞較已經(jīng)建系的培養(yǎng)消化時間相對較長。吹打細胞時動作要輕巧，盡可能減少對細胞的損傷。

③初次傳代時細胞接種數(shù)量要多一些，使細胞能盡快適應新環(huán)境有利于細胞生存和增殖。隨消化分離而脫落的組織塊也可一并傳入新的培養(yǎng)瓶。

體外培養(yǎng)技術中所謂的傳“代"概念并不等于細胞生物學中“親代細胞"與“子代細胞"中“代"的概念。傳代培養(yǎng)的實質(zhì)就是分離后再次培養(yǎng)，進行一次分離再培養(yǎng)稱之為傳一代，傳代數(shù)可以衡量培養(yǎng)物的培養(yǎng)年齡。

傳代是細胞分裂造成的結果，細胞從一次分裂結束到下一次分裂結束為一個細胞周期，分為間期與分裂期兩個階段。細胞周期能準確表示細胞增殖速度。兩次細胞分裂之間的時間也可以用細胞世代時間來表示，所以細胞周期指細胞一個世代所經(jīng)歷的時間。正常細胞培養(yǎng)的世代數(shù)有限，只有癌細胞和發(fā)生轉化的細胞才能無限生長下去。

傳代代數(shù)與細胞的世代數(shù)（增殖代數(shù)）并不是同一個概念。在細胞培養(yǎng)時，所說的“第6代細胞"指細胞已經(jīng)傳代6次。以貼壁細胞為例，每傳代一次，大概要倍增3~6次，細胞要經(jīng)歷如下生長過程：游離期、貼壁期、潛伏期、對數(shù)生長期和停止期（平臺期）。當細胞達到平臺期時，就要進行傳代培養(yǎng)，否則細胞會中毒，發(fā)生形態(tài)改變，甚至死亡。

培養(yǎng)細胞有密度依賴和接觸抑制的特點，細胞濃度過低，不易存活，表現(xiàn)為細胞在達到增長前有較長的滯留期；細胞濃度過高，發(fā)生接觸抑制后生長遲緩甚至死亡，所以傳代比例通常按1:2~1:4的稀釋度進行。傳代后細胞的接種濃度一般為5x105個/mL。

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