人正常肝細胞培養步驟

　　我們現在所知道的地球上的生命，人類、動物、植物，還有肉眼看不見的微觀世界，這些林林總總的生命體都是由細胞所組成的。所以，生命體如何繁衍、變化、進化，組成紛繁復雜的大千世界，全都是依靠這些細胞在工作。細胞也有各式各樣不同的分類，其中有一類細胞它很特殊，而且擁有其他細胞不具有的一項重要功能——不斷繁衍、自我復制、自我更新。這類細胞就是干細胞。

　　人正常肝細胞培養步驟：

　　1）培養基及培養凍存條件準備：

　　1.準備培養基；

　　2.培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%；

　　3.凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

　　2）細胞處理：

　　復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入lOcm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%即可進行傳代培養。

　　對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2ml消化液于培養瓶中，置于37°C培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。