a549細胞凍存方式

　　a549細胞正常狀態下都呈長梭形,從你提供的細胞圖片看,圓形細胞較多,可能是細胞生長過密,相互擠壓所致!還有許多突起,估計是有其他細胞污染,或是培養液使用時間過長，有污染所致，建議更換新鮮培養液，用新瓶傳代,密度不要過高!近來關于細胞過度傳代的問題也引起了較為普遍的關注，由于過度傳代造成遺傳性狀的不穩定性和一些表型的喪失使得體外生物學效應的偏差也日益增大，因此盡量在購買或者引進細胞株的時候盡量多多凍存低代次的細胞，以獲得接近原始建株細胞的生物學特性。

　　a549細胞凍存方式：

　　1．將細胞消化下來，移入離心管離心，棄上清；

　　2．準備凍存液比例：50%FBS+40%培養基+10%DMSO（現用現配）；

　　3.加1.5凍存液在離心管中，將細胞吹打均勻，移入凍存管內。

　　放入-20度冰箱2-4小時后．再放入-80度冰箱過夜，第二天放入液氮罐保存。

　　A549細胞人肺癌細胞系常見的污染如下：

　　1、細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染細菌的不同，可有不同的外形，培養液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。

　　2、霉菌：培養液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質，37度孵箱培養2-3天，仍清亮，但出現絮狀雜質，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長，但時間長之后，細胞的活力狀態變差，

　　用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。

　　3、支原體：黑色的，好象多為多形，培養液一般培養液一般會渾濁，原體感染，國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢死去。

　　4、黑蛟蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養液也是不渾的，一般不會太影響，細胞還是可以用的。

　　5、真菌：一般培養液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢，不象細菌那么容易被發現，但是一旦發現有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。