人支氣管成纖維細胞是氣道與外界環境接觸的一道屏障

　　人支氣管成纖維細胞是氣道與外界環境接觸的一道屏障，在慢性阻塞性肺疾病、哮喘、肺癌、肺囊性纖維化以及一些感染性呼吸道疾病的發病機制中均起著重要的作用，逐漸受到人們的重視。支氣管上皮細胞不僅是各種病原體、炎癥介質作用的靶細胞，還作為效應細胞合成、釋放多種炎性介質和細胞因子，從而參與氣道炎癥及免疫反應，而體外培養的原代支氣管上皮細胞由于與體內原組織在形態結構和功能活動上存在很大的相似性，支氣管上皮細胞的原代培養成為研究呼吸道上皮功能的必要條件。

　　人支氣管成纖維細胞試驗方法：

　　1.體外培養人支氣管上皮細胞株，人胚肺成纖維細胞株，并建立人支氣管上皮細胞與人胚肺成纖維細胞共培養體系。

　　2.BRS-3激活、O3應激支氣管上皮細胞后與肺成纖維細胞共培養，用MTT比色法檢測肺成纖維細胞及支氣管上皮細胞的增殖活性，羥脯氨酸試劑盒檢測成纖維細胞膠原合成的狀況。

　　3.為初步探討支氣管上皮細胞共培養對成纖維細胞的作用介質，收集支氣管上皮細胞培養上清液，ELISA法及放射免疫分析法檢測TGF-β1、TNF-a、PGE2含量，并觀察其時間變化以及其含量與成纖維細胞活動的關系。

　　4.為證實共培養效應的重要介質為TGF-β1，TGF-β1反義寡核甘酸（ASO）設計，脂質體轉染，MTT法檢測TGF-β1ASO轉染的支氣管上皮細胞對成纖維細胞的增殖活性。

　　5.為觀察支氣管上皮細胞TGF-β1表達是否受與成纖維細胞共培養的影響，用免疫組織化學法檢測單獨培養的HBECs與共培養的HBECS TGF-B1表達差異，并進行定量分析。