染色凋亡試劑盒使用過程

　　染色凋亡試劑盒貼壁細胞：

　　A.取潔凈蓋玻片在70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時間，無菌超凈臺內吹干或用無菌的PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍，再用細胞培養液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內，種入細胞培養過夜，使約為50%-80%滿。

　　B.刺激細胞發生凋亡后，吸盡培養液，加入0.5ml固定液，固定10分鐘或更長時間（可4℃過夜）。

　　C.去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動。

　　D.加入0.5ml Hoechst33258染色液，染色5分鐘。也宜用搖床，或手動晃動數次。

　　E.去染色液，用PBS或0.9%NaC1洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動。

　　F.滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上貼有細胞的蓋玻片，讓細胞接觸封片液，盡量避免氣泡。

　　G.熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。激發波長350nm左右，發射波長460mm左右。

　　染色凋亡試劑盒懸浮細胞：

　　A.離心收集細胞樣品于1.5ml離心管內，加入0.5ml固定液，緩緩懸起細胞，固定10分鐘或更長時間（可4℃過夜）。

　　B.離心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。洗滌期間手動晃動數次。

　　C.離心后吸去大部分液體保留約50ul液體，再緩緩懸起細胞，滴加至載玻片上，盡量使細胞分布均勻。

　　D.稍晾干，使細胞貼在載玻片上不易隨液體流動。

　　E.均勻滴上0.5ml Hoechst33258染色液，染色5分鐘。用吸水紙從邊緣吸去液體，微晾干。

　　F.去染色液，用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動。

　　G滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。

　　H.熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。激發波長350nm左右，發射波長460mm左右。